Director: Rivero Carla Ivana -
Resumen
En este proyecto se realizarán ensayos para producir localmente una forma soluble de la proteasa del virus del grabado del tabaco (TEV) en una cepa de Escherichia coli ingenierizada, con el objetivo de emplearla como reactivo para la remoción de etiquetas de
afinidad en proteínas recombinantes. La proteasa TEV reconocerá específicamente la secuencia de aminoácidos ENLYFQ/G, lo que la convertirá en una herramienta valiosa para la escisión precisa de proteínas de fusión generadas por ingeniería genética. Se utilizará una variante con la mutación S219V, la cual reducirá su autólisis y aumentará la eficiencia catalítica en comparación con la enzima silvestre.
Para favorecer su solubilidad y evitar la formación de cuerpos de inclusión, la proteasa se expresará como proteína de fusión con la proteína de unión a maltosa (MBP). Además, se incorporarán etiquetas de Arginina (N- terminal) e Histidina (C-terminal), siendo esta última la que permitirá su purificación mediante cromatografía de afinidad a metales inmovilizados (IMAC).
